Holey Carbon Films

在製備低溫電子顯微鏡(cryo-EM)樣品時，其中一個重要的環節就是使用的grid的種類，有別於傳統負染色技術所使用之grid上所鍍的是連續碳膜(continous carbon film)，cryo-EM使用的grid上鍍的碳膜是有洞的(holey carbon film)。



這個洞主要是讓蛋白質樣品在冷凍的過程中得以懸浮其中，不但可以降低擷取影像時從碳膜所衍生出來的雜訊，還可以讓樣品免於擠壓的破壞。Holey carbon film的製備方法可以參照Dr. Baker網站上的說明，依照這個方法製造的holey carbon film好處是:(1)便宜(2)可產生各種不同大小的洞缺點是在收data的過程中，於focus mode,你的beam很有可能會燒掉其他鄰近的洞，因為洞跟洞之間的距離不是固定的。自製的holey carbon film至少要在樣品製備前一天準備好，讓grid有充足的時間風乾。
另外一個方法就是去買現成的，其中最多人使用的是QUANTIFOIL® Holey Carbon Films，好處是:(1)洞的大小及洞跟洞之間的距離固定(2)實驗重複性高，缺點當然就是$$$貴...我不知道台灣有沒有代理商，但之前在美國是直接跟德國的公司訂購，感覺上比跟進口商買還便宜。